蛋白質(zhì)芯片技術(shù)
蛋白質(zhì)芯片技術(shù)又稱蛋白質(zhì)陣列，是指將已知的大量蛋白質(zhì)固定在經(jīng)化學(xué)修飾的固相載體上，在保留蛋白質(zhì)物化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，蛋白質(zhì)與載體表面結(jié)合，再用激光掃描系統(tǒng)或者電感耦合器件獲取相關(guān)圖像；然后用專門的計算機(jī)軟件分析圖像、定性定量結(jié)果。Howell等采用俗稱軟蝕刻的微接觸印刷技術(shù)制作出了一種可以檢測大腸桿菌E.coli O157∶H7及鮭腎桿菌的抗體微陣列，結(jié)果表明：此芯片與其他有害微生物的交叉反應(yīng)少，檢出濃度為7×107cfu/ml，檢測時間是40min，是一種很有效的微生物檢測方法。
方珍建立了檢測E.coli O157
H7的液相蛋白芯片方法。通過繪制檢測曲線，分別應(yīng)用該方法及H2O作溶解劑的液相芯片方法檢測實(shí)際牛肉樣品。比較該方法與細(xì)菌分離培養(yǎng)法的陽性檢出率，能檢出陽性的低濃度為103cfu/ml，低檢出限為100cfu/ml；與18種腸道菌無交叉反應(yīng)，特異性良好；3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，批間變異系數(shù)7.61，重復(fù)性良好；應(yīng)用該方法檢測牛肉樣品中人工添加細(xì)菌，能檢出陽性的低濃度為0.5cfu/ml；應(yīng)用該方法檢測154份實(shí)際牛肉樣品，檢出陽性樣品19份，而細(xì)菌培養(yǎng)法檢出陽性樣品16份。蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是一種高特異性、高靈敏度、高通量、重復(fù)性好、應(yīng)用性強(qiáng)、適用范圍廣且微型化的分析技術(shù)，在生命科學(xué)的各個研究領(lǐng)域有很好的發(fā)展前景，但同基因芯片技術(shù)一樣，檢測費(fèi)用高，發(fā)展還不成熟。
納米金標(biāo)記技術(shù)
納米金標(biāo)記技術(shù)是指直徑在1nm—100nm金的微小顆粒，具有高電子密度，介電特性和催化作用，可以與多種生物大分子結(jié)合，且不影響生物大分子的生物活性。近年來，基于納米金標(biāo)記的快速檢測研究在有害微生物方面應(yīng)用比較多，檢測的微生物種類也比較多，國內(nèi)外科技工作者通過對納米金顆粒表面特性的處理以及在納米金顆粒表面標(biāo)記上特定的寡核苷酸探針，開發(fā)研究出了新的微生物檢測系統(tǒng)。
利用氨基偶聯(lián)法在傳感器表面固定多克隆抗體作為一抗，金納米粒子標(biāo)記的大腸桿菌E.coli O157∶H7的多克隆抗體作為二抗，通過三明治方法用雙通道表面等離子體共振傳感器對E.coli O157∶H7進(jìn)行檢測。SPR直接法檢出限為103cfu/ml，線性范圍為103cfu/ml—109cfu/ml；金納米粒子增強(qiáng)三明治法的檢出限為10cfu/ml，線性范圍為10cfu/ml—1010cfu/ml，靈敏度提高100倍，檢測范圍更寬，檢測時間縮短，選擇性和重現(xiàn)性較好。此技術(shù)具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、價廉、樣品所需量少等優(yōu)點(diǎn)，適合現(xiàn)場篩選，在飼料檢測中有著廣泛的應(yīng)用價值和發(fā)展前景。
目前，生物學(xué)領(lǐng)域的專家通過對微生物快速檢測方面深入的研究，開發(fā)了一系列技術(shù)，有ATP熒光儀、多功能微生物熒光檢測儀、微生物實(shí)時光電檢測系統(tǒng)、紙片法。這些用于食品中有害微生物的快速檢測技術(shù)，未來同樣可以在飼料中應(yīng)用，這些方法的應(yīng)用將為飼料安全提供有力的保障，同時可以促進(jìn)我國飼料工業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。下面重點(diǎn)介紹常用的兩種有害微生物快速檢測設(shè)備。
微生物快速檢測系統(tǒng)
高性能便攜式微生物檢測儀將多種檢驗(yàn)方法的優(yōu)點(diǎn)集合應(yīng)用，如培養(yǎng)皿法、酶法、免疫法、基因法，具有便捷、操作簡單、檢驗(yàn)迅速、高靈敏性、高特異性、消耗成本低、定性半定量測量等諸多優(yōu)點(diǎn)。
快速檢測對象:活菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、腸道桿菌科、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、李斯特菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌、霉菌(、酵母菌、軍團(tuán)菌等，可以定量檢測。
快速檢測產(chǎn)品特點(diǎn)有應(yīng)用范圍廣，應(yīng)用于食品、飼料、藥品、水質(zhì)、空氣微生物檢測等眾多領(lǐng)域，可檢測固態(tài)、液態(tài)、氣態(tài)及膏狀、漿狀等多種樣本。使用方便：一套便攜系統(tǒng)即可完成采樣、實(shí)驗(yàn)、后處理等工作，無需配備多種檢測儀器。操作簡單：檢測樣本只需1ml或1g，且無需前處理，只需3個步驟就可完成操作。高靈敏度：可檢測到數(shù)量級為1cfu的目標(biāo)微生物，滿足國內(nèi)國際微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)。高特異性：特異性高達(dá)99.999%，杜絕非目標(biāo)微生物造成的實(shí)驗(yàn)干擾。準(zhǔn)確度高：可100%定量分析。檢測數(shù)量：8個插槽可同時提供8項(xiàng)不同實(shí)驗(yàn)，13類不同標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)環(huán)境?？焖贆z測：快10min即可得到檢測結(jié)果，可用于現(xiàn)場檢測。高智能化：能夠自動控制孵育溫度和孵育時間，并可自動生成實(shí)驗(yàn)報告。全自動化：獨(dú)立、持續(xù)地檢測并記錄瓶中的微生物數(shù)量。
將激光掃描合成成像技術(shù)與活細(xì)胞熒光酶標(biāo)記相結(jié)合，研制成功 RDI微生物快速檢測儀。該儀器可在1.5小時內(nèi)對可過濾樣品中的微生物及原生蟲進(jìn)行快速計數(shù)，適于食品、飼料，化妝品及藥品行業(yè)。其特點(diǎn)：只檢測活細(xì)胞數(shù)，激光對整張濾膜掃描后自動讀數(shù)，速度極快、無需增菌，可在90—l00min內(nèi)出結(jié)果；可選配熒光顯微鏡與儀器連接，自動定位對可疑微生物進(jìn)行確認(rèn)觀察。靈敏度：可檢測出1個微生物或原生蟲；檢測范圍：1—5000個細(xì)胞
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